阿尔兹海默症常用案例细胞
一、人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞系
二、人神经母细胞瘤细胞BE(2)-M17细胞系
三、NG108-15细胞系
四、Neuro-2a细胞系
五、BV-2细胞系
六、HT22细胞系
特点描述
团块(成团成片,堆叠的等)特性常,推荐细工优化胰酶-细胞膜无损,目的就是把团块消化成单个,靠吹打损伤大,后面有条件可以是试试,转染前,冻存前消化成单个大大提升转染效率,与复苏后活率,要有时间比较,大家一起讨论。这类团块特性冻存条件有些特别处,建议与10%DMSO做个比较,另冻存建议后的海绵盒加棉花包裹,一分钟降0.4-06度,建议这个有时间也做比较。
另上清液收一部分保留,长期保存在负80,后面复苏后一代传代后加有奇效(生长瞬间长满)BV2有这个特效,上清其他用图,转染后死细胞过多救助。理由是,类器官传代需汇50%,才能继续培养,全新完全培养基换后全死(参考赛默飞类器官培养)其他上清回输细胞有需要资料的可回信,我统计的难养的,乳腺,前列腺,腺类,胶质类。
细胞应用细工预实验参考-上清回输利用
预实验上清回输要能拿到理想结果,对成球解决也有很大帮助,成团成片,堆叠统计了很多年,各类细胞的。免疫类最早开始统计,这个解决是直接加液分瓶,不弃液,临床培养直接补液,后期收获时,就没有团聚了,参考
关于上清回输思考:国内建系目的,经一系列难养细胞问题统计,上清回输救助细胞有明显效果,国内感兴趣组可一起讨论。
几项长期统计与上清回输有关联的有,
1:难养系大部分需要上清救助,案例较多,腺类、胶质类、神经类、乳腺类、前列腺类系、胰岛胰腺类、免疫类,上皮、成团成片特性,堆叠特性
2:细胞系类我们在解决团聚后,转染效率可明显提升,HEPG2,HEP3B、腺类神经类并存系类
3:冻存复苏胰酶法解决团聚后,复苏活率可也提升,这类冻存我们推荐传统方法,DMSO+程序降温能有更高细胞活率要求、临床样本研究组
4:类器官传代需50%上清回输。
5:外泌体研究,上清产物
6: 极体(polar body)-胚胎发育、
7:Matrigel组成,从富含胞外基质蛋白的 EHS 小鼠肿瘤中提取的,有研发生产用户可讨论细工优势。
经上述统计总结,这类细胞属于营养缺乏是其中一种情况,案例细胞是临床培养免疫细胞方法,不弃液培养,后期收获细胞团聚可打开。雪旺类只生长细胞膜,细胞壁增长,该项还没有深入问题统计,癫痫病机制研究,阿尔茨海默病和帕金森病,突触传递调控,可塑性细胞培养用户可深入讨论。
生长慢
细胞系:
1:种子库级别试剂-统一标准后,痛点问题可找到准确点,后期会推出自动化培养-冗余试剂配套精准SOP
2: 细胞瓶培养,控制完全培养基PH变化更可行,皿类二氧化碳代谢较快,PH变化太大,三天以上增殖瓶优势明显,很多高手忽略项关键因素,细工救助案例多,具体细胞具体分析细节。
3:细工优化胰酶优势,细胞膜无损,预实验建议胰酶敏感细胞长期验证,我们是对种子库级别要求长期验证后评测。
4:原代,离体后处理组织块,化学力,机械力影响,建系是我司统计目的,血液类建议直接培养,目的细胞获得,可参考我司简易单克隆法,结合促贴壁试剂,拿到目的细胞。
动物模型-成瘤难痛点关键词
接种前分析:细胞名称,生长特性,堆叠,成团成片,粘连,化学力-机械力解离质量(酶解-钝解差别),最好做转染后结果参考,冻存复苏后活率参考,
接种后分析:不成瘤,炎症、空洞、先成瘤后消失
痛点长期验证统计后,PDX临床应用中成瘤不易给出些参考建议,人源化模型通过细胞质量提升提高人源化比例等更多技术储备。
我们痛点统计,细胞培养中问题统计为主,配套试剂开发及自动化培养应用中撰写详尽的potocol,细胞层面对相关给出参考建议:细胞培养,动物模型,类器官,PDX,人源化。
细胞培养
适合国内实验室: 黑点,生长慢,成瘤不稳定组
长期统计目的:冗余试剂验证与精准SOP汇总统计参考讨论-配套自动化培养
冗余试剂开发需给设备、技术、细胞、水试剂、操作方法多方位融合,可行性高,基础实验要能顺利完成(解决痛点难点)或者提出可行性参考建系,国内五百家实验室,十年细胞培养问题统计,以最常见293案例,开始更多数据技术共享及自动化培养应用中统计开始,近五年细胞工厂应用,配合现在自动化培养、微流控制培养、细胞力学研究一些问题统计,统计更多自动化细胞培养中问题,建系目的,中式工业应用目的,简单易行思路。
试定义包含解决问题,发生问题间相互培养让黑点发生于消失。
延展耐药株-成瘤模型-建特殊系应用自动化培养提前讨论
国内实验室多,也呈现各种难题,在后面自动化培养冗余试剂开发过程中,类似难题出现,如不能解决,影响后期自动化培养各种进展,我司正好有这方面技术储备,我们目的是建国内细胞系,难点痛点问题统计会一直统计下去,热点包括,耐药株,建系痛点(细胞培养优化)简易单克隆,冻存复苏建系、种子库应用,蛋白互作用,细胞互作用,膜片钳、工业应用技术储备等,都可搭乘自动化培养中各种问题,冗余试剂理念提出,适合国内实验室的技术储备一直在做。实战案例最能说明问题,优略验证也快。