谷氨酰胺酶测定试剂盒 微量法
产品名称: 谷氨酰胺酶测定试剂盒 微量法
英文名称: Micro Glutaminase(GLS)Assay Kit
产品编号: BC1455
产品价格: 0
产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三
品牌商标: Solarbio
更新时间: 2025-01-03T10:07:38
使用范围: null
- 联系人 : 索莱宝-龚思雨
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- 所在区域 : 北京
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产品内容:
试剂一:液体120mL×1瓶,4 ℃保存;
试剂二:液体40 mL×1瓶,4 ℃保存;
试剂三:液体60 mL×1瓶,常温保存;
试剂四:液体1.5 mL×1支,常温保存;
试剂五:液体3 mL×1瓶,常温避光保存;
标准品:液体1mL×1支,100μmol/mLNH4+,常温保存。
产品说明:
GLS(EC3.5.1.2)存在于高等动物和某些细菌以及植物根中,催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨,在氮素代谢中具有重要调控作用,尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨,利用奈氏试剂检测氨增加的速率,即可计算其酶活性。
需自备的仪器和用品:
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
称取约0.1g组织,加入1mL试剂一冰浴研磨,于4 ℃ 8000 g离心10min,取上清,作为待测液(粗酶液)。
二、标准曲线绘制:
取50μL标准液加入450μL蒸馏水中,制备10μmol/mL标准溶液,然后稀释成1、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0μmol/mL标准液
三、测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至420nm,蒸馏水调零。
2、样品测定(在EP管中加入下列试剂)
试剂名称(uL)
测定管
对照管
标准管
上清液
100
-
-
蒸馏水
-
100
-
试剂一
25
25
-
试剂二
400
400
-
混匀,37℃水浴1 小时
试剂三
525
525
-
混匀,8000 g,常温离心10 min;取上清液,在EP管或96孔板中加入下列试剂
上清液
130
130
-
标准液
-
-
130
试剂四
10
10
10
试剂五
20
20
20
蒸馏水
40
40
40
混匀,420nm处读取吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。对照管只要做一管。
分别测定0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0μmol/ml标准液在420nm下的吸光度(A),计算ΔA=A-A0(0μmol/ml下的吸光度)以ΔA为y轴,标准液浓度为x轴绘制标准曲线,测定的回归方程为y=kx+b。
四、酶活性计算
1、 将ΔA带入回归方程中计算出x。
2、谷氨酰胺酶活性计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位定义:37℃下每mg蛋白质每小时催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定义为一个酶活力单位。TUNEology 波长可调检测卡盒-->